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    我司課堂:關于細胞的樣的保存,您需做好這六步兩留意??!

    發布時間: 2020-05-28  點擊次數: 203次

    ◎操作步驟:

     

    1、在37℃ 5% CO2條件下將細胞加在處理的載玻片上,用培育基培育,時間通過預試驗確定;

     

    2、細胞長好后,用洗刷液洗2分鐘×3次,室溫下將其放入細胞固定液中固定30-60min,蒸餾水洗刷;

     

    3、室溫下用洗刷液充沛洗刷固定細胞,(干燥后-20℃冰凍保存2周以上)

     

    4、雜交前將固定的細胞進行如下處理;順次在70%,90%,100%的乙醇中浸泡,脫水每次
    5min,用二甲苯洗刷,除掉殘留脂質順次在100%,90%,70%乙醇中浸泡,進行再水化,每次5min,后浸泡于洗刷液中;

     

    5、在37℃用胃蛋白酶溶液10min處理固定的細胞,以增加細胞對大分子試劑的通透性,再用洗刷液洗5min;
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    6、用1%甲醛固定10min,用洗刷液洗凈。

     

    ◎留意!

       
    1、所有溶液都必須用RNA酶抑制劑處理。
        

    2、操作中重要的是及時固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC處理,以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外,過度固定對原位雜交有明顯的不利影響。

     

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